प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी | परिभाषा | काम करना | 3 महत्वपूर्ण सीमाएँ

प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी | परिभाषा | काम करना | 3 महत्वपूर्ण सीमाएँ

प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी

विषय-सूची

प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी क्या है?

प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी एक प्रकार का यौगिक सूक्ष्मदर्शी है जो प्रकाश स्रोतों के कई प्रकारों के साथ काम करता है, जिसमें संचरण, अवशोषण, परावर्तन और प्रकीर्णन के उपयोग के स्थान पर छवियों को उत्पन्न करने के लिए एक नमूना तरंगित करने के लिए विभिन्न तरंग दैर्ध्य होते हैं। ये माइक्रोस्कोपिक वेरिएंट मुख्य रूप से जैविक नमूनों के अवलोकन के लिए उपयोग किए जाते हैं। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी एक एपी-प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोप या एक जटिल कॉन-फोकल माइक्रोस्कोप के सरल डिजाइन का उपयोग करके प्राप्त किया जा सकता है।

प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी कैसे काम करती है?

सैंपल को पहले माइक्रोस्कोपिक स्टेज पर रखा जाता है। तब नमूना को आवश्यक प्रकाश की मात्रा के आधार पर प्रकाशित किया जाता है। प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी में, विभिन्न तरंग दैर्ध्य के प्रकाश का उपयोग नमूने को रोशन करने के लिए किया जाता है और इस प्रकाश को द्वारा अवशोषित किया जाता है फ्लोरोफोरस नमूने में मौजूद है जो आने वाली रोशनी की तुलना में लंबी तरंग दैर्ध्य या एक अलग रंग के प्रकाश पुंज का उत्सर्जन करता है। एक वर्णक्रमीय उत्सर्जन फिल्टर का उपयोग कमजोर उत्सर्जित प्रकाश को मजबूत रोशनी वाले प्रकाश से अलग करने के लिए किया जाता है। एक सामान्य प्रतिदीप्ति सूक्ष्मदर्शी में निम्नलिखित भाग होते हैं।

  1. एक उत्तेजना फिल्टर।
  2. एक द्विध्रुवीय दर्पण या बीम-फाड़नेवाला।
  3. एक उत्सर्जन फिल्टर।
  4. एक प्रकाश स्रोत (जो कि एक क्सीनन चाप दीपक, पारा-वाष्प दीपक, उच्च-शक्ति एलईडी, या लेजर हो सकता है)।
  5. उद्देश्य लेंस का एक सेट.
  6. एक ओकुलर लेंस।
  7. नमूना धारण करने की एक अवस्था।
  8. एक डिटेक्टर।

डाइक्रोइक बीम स्प्लिटर और उत्तेजना और उत्सर्जन फिल्टर का चयन इस तरह किया जाता है कि वर्णक्रमीय उत्तेजना उत्सर्जन विशेषताओं के साथ संगत होनी चाहिए, नमूनों को लेबल करने के लिए उपयोग किए जाने वाले फ्लोरोफोर की और इस तरह उस समय एकल रंग या फ्लोरोफोर के वितरण का पता लगाया जाता है। . बहुरंगी छवियों को देखने के लिए कई एकल-रंग छवियों को संयोजित करने की आवश्यकता होती है। कुछ सूक्ष्म डिजाइन एक ऐपिस लेंस के स्थान पर माइक्रोस्कोप ट्यूब में एक सीसीडी (चार्ज-युग्मित डिवाइस) के साथ आते हैं। एक सीसीडी-स्थापित माइक्रोस्कोप में, सीसीडी को इंटरमीडिएट इमेज प्लेन पर रखकर मॉनिटर स्क्रीन पर छवि निर्माण होता है।

एपी-प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी क्या है?

एपी-फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी में फ्लोरेसेंस के साथ नमूने की उत्तेजना और उत्सर्जित फ्लोरोसेंट लाइट का पता लगाने के लिए प्रकाश के उसी पथ का अनुसरण करके यानी ऑब्जेक्टिव लेंस के माध्यम से किया जाता है। ऐसे सूक्ष्मदर्शी विशेष रूप से जीवित नमूनों को देखने के लिए उपयोग किए जाते हैं। छवियों का अधिक से अधिक रिज़ॉल्यूशन प्राप्त करने के लिए, उद्देश्य लेंस के संख्यात्मक एपर्चर को बढ़ाया गया है। एपी-प्रतिदीप्ति एक उच्च सिग्नल-टू-शोर अनुपात उत्पन्न करती है क्योंकि कुछ मात्रा में परावर्तित रोशन प्रकाश नमूने से उत्सर्जित प्रकाश के साथ जुड़ता है। इस कारण से, डाइक्रोइक बीमस्प्लिटर का उपयोग किया जाता है। यह बीमस्प्लिटर एक चयनात्मक तरंग दैर्ध्य फिल्टर के रूप में कार्य करता है और केवल उत्सर्जित प्रतिदीप्ति प्रकाश को ऐपिस या ओकुलर लेंस तक पहुंचाता है।

फ्लोरोसेंट माइक्रोस्कोपी के दोष क्या हैं?

  1. फोटोब्लीचिंग प्रक्रिया के परिणामस्वरूप समय के साथ फ्लोरोफोर्स की रोशनी के साथ, फ्लोरोफोर्स फ्लोरोसिस करने की अपनी क्षमता खो सकते हैं। फोटोब्लीचिंग तब होता है जब फ्लोरोसेंट अणु फ्लोरेसेंस के दौरान इलेक्ट्रॉनों के उत्तेजना के कारण धीरे-धीरे रासायनिक क्षति से पीड़ित होते हैं। फोटोब्लीचिंग फ्लोरेसेंस माइक्रोस्कोपी द्वारा नमूना देखने की समय अवधि को गंभीर रूप से प्रभावित कर सकता है। 
  2. प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी ने जीवित कोशिकाओं की जांच की अनुमति दी है। हालांकि, ये जीवित कोशिकाएं फोटोटॉक्सिसिटी (मुख्य रूप से लघु-तरंग दैर्ध्य प्रकाश के साथ) के लिए प्रवण होती हैं और फ्लोरोसेंट अणु विशिष्ट प्रतिक्रियाशील एजेंटों का उत्पादन कर सकता है जब इसे प्रकाशित किया जाता है, इससे फोटो-विषाक्त प्रभाव बढ़ जाता है।
  3. प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी केवल कुछ संरचनाओं की इमेजिंग और अवलोकन की अनुमति दे सकती है जिन्हें प्रतिदीप्ति के लिए लेबल किया गया है। यानी, एक ऊतक का नमूना प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी की मदद से देखा जा सकता है यदि नमूनों को एक फ्लोरोसेंट डीएनए दाग के साथ प्रस्तुत किया जाता है। यह कोशिकाओं के भीतर डीएनए संगठन दिखा सकता है लेकिन कोशिका आकृति विज्ञान के बारे में कुछ भी प्रकट करने में असमर्थ है।

एक फ्लोरोसेंट नमूना कैसे तैयार किया जाता है?

हम जानते हैं कि, प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी प्रतिदीप्ति के लिए लेबल किए गए केवल कुछ संरचनाओं की इमेजिंग और अवलोकन की अनुमति देता है। इसलिए, देखे जाने वाले नमूने को विभिन्न तकनीकों द्वारा फ्लोरोसेंट बनाया जाता है जैसे:

  1. जैविक फ्लोरोसेंट दाग: कई प्रकार के फ्लोरोसेंट दाग बनाए जाते हैं, जो कि जैविक नमूनों की एक श्रृंखला के साथ संगत होते हैं। ऐसे प्रतिदीप्ति दाग के कुछ उदाहरण DRAQ7 और DRAQ5 (लाल बत्ती से उत्साहित) हैं, हेक्स्ट और डीएपीआई (पराबैंगनी तरंग दैर्ध्य प्रकाश द्वारा उत्साहित), फैलोलाइडिन, कोलेजन हाइब्रिडाइजिंग पेप्टाइड, आदि।
  2. इम्यूनोफ्लोरेसेंस: इम्यूनोफ्लोरेसेंस का उपयोग एंटीबॉडी को बांधने के लिए किया जाता है।
  3. फ्लोरोसेंट प्रोटीन: फ्लोरोसेंट प्रोटीन का उपयोग डीएनए को संशोधित करने के लिए किया जाता है ताकि अणु प्रतिदीप्ति प्रदर्शित करें।
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी | परिभाषा | काम करना | 3 महत्वपूर्ण सीमाएँ
का एक नमूना हिलसा शुक्राणु से सना हुआ SYBR हरा में क्युवेट नीली रोशनी से रोशन। छवि स्रोत: जेफिरिस - स्वयं का कार्य
सीसी द्वारा एसए 3.0
फ़ाइल: प्रतिदीप्तिमाइक्रोस्कोप नमूना हेरिंगस्पर्म SYBRGreen.jpg
प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी | परिभाषा | काम करना | 3 महत्वपूर्ण सीमाएँ
एक फ्लोरोसेंट दाग। छवि स्रोत: स्वस्तिपांडे - स्वयं का कार्य
सीसी द्वारा एसए 4.0
फ़ाइल: फ्लोरोसेंट dy.jpg

यौगिक सूक्ष्मदर्शी यात्रा के बारे में अधिक जानने के लिए https://lambdageeks.com/compound-microscope-working-5-important-uses/

संचारी चक्रवर्ती के बारे में

प्रतिदीप्ति माइक्रोस्कोपी | परिभाषा | काम करना | 3 महत्वपूर्ण सीमाएँमैं एक उत्सुक सीखने वाला हूं, वर्तमान में एप्लाइड ऑप्टिक्स और फोटोनिक्स के क्षेत्र में निवेश किया गया है। मैं SPIE (प्रकाशिकी और फोटोनिक्स के लिए अंतर्राष्ट्रीय समाज) और OSI (ऑप्टिकल सोसाइटी ऑफ इंडिया) का एक सक्रिय सदस्य भी हूं। मेरे लेखों का उद्देश्य गुणवत्ता विज्ञान अनुसंधान विषयों को सरल और ज्ञानवर्धक तरीके से प्रकाश में लाना है। अनादि काल से विज्ञान विकसित हो रहा है। इसलिए, मैं विकास में टैप करने और इसे पाठकों के सामने प्रस्तुत करने की पूरी कोशिश करता हूं।

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